从NCBI的primer blast里设计出的引物往往有很多对，但并不是每一对都有效，选择有效的引物有一些原则。
工具/原料
电脑
方法/步骤
1
首先一定要确保“Exon junction span”选项设置为“primer must span an exon-exon junction”,这是为了排除DNA污染。
2
产物长度一般设置为90-180为较好。
3
Tm值要在60℃左右，且正反引物的值要接近，不能差太远。
4
GC含量也要接近，不能差太多，一般在45%-55%之间较好。
5
自我配对不能太高。
6
越靠前越好，一般在前三对里选。
7
怎样看某对引物能不能检测出其它相似基因：在两条引物中，针对其他基因，一条引物突变碱基数大于等于3，另一条引物突变碱基数大于等于2，就不会PCR出其他基因。
8
最后进行PCR验证，能P出相应长度的条带就是有效的引物。
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