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沙门氏菌(PCR-荧光探针法)试剂盒检测沙门氏菌

沙门氏菌(PCR-荧光探针法)试剂盒采用taqman荧光探针的技术,在反应过程中沙门氏菌特异的荧光探针跟靶核酸杂交, 同时被Taq酶水解, 把探针上的荧光基团和淬灭基团分开, 从而通过荧光增量来实时判断沙门氏菌的存在。
方法/步骤
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1. 基因组提取(1) 取培养后的菌液约1.5ml,12000rpm离心2min,去上清。(2) 加入200μl无菌水,充分混匀,12000rpm离心2min,去上清。(3) 加入80μl核酸提取液,用移液器吹吸混匀,50℃水浴1小时,100℃水浴15分钟,冰上放置10分钟后12000rpm离心3min。(4) 取上清用于荧光PCR检测。

2

1. 荧光定量PCR检测按下列组份配制反应液(反应液配制请在冰上进行)        沙门氏菌荧光PCR反应液:        5.7μlTaq酶:                                  0.3μl样品DNA或阴阳性对照品:       5μlDEPC H2O:                           14μl                                     PCR扩增           95℃ 2 min       95℃ 15 sec      60℃ 1 min            荧光检测在60℃,反应体系为25μl,荧光通道选用FAM通道。

注意事项
1

本试剂盒不做临床诊断

2

实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范,试验人员必须进行专业培训,实验过程中严格分区进行(试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区),实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备,各区用品不能交叉使用。

3

对每次实验进行质量控制

4

试剂使用前要完全解冻,并混合均匀,但应避免反复冻融,探针应避光保存

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6.所有检测样品应视为具有传染性物质,操作和处理均需符合相关法规要求:卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。

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