HE染色液
苏木素是碱性染料,蓝紫色,可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性,具有嗜碱性;
伊红是酸性染料,粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性,具有嗜酸性;
不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性。
样品处理:a.对于石蜡切片:二甲苯中脱蜡5-10分钟;换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟;无水乙醇5分钟;90%乙醇2分;70%乙醇2分钟;蒸馏水2分钟.b.对于冰冻切片:蒸馏水2分钟。c 对于培养细胞:用4%多聚甲醛固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。
苏木素伊红(HE)染色对于上述处理好的样品:苏木素染色液染色5-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。浸自来水中冲洗去多余的染色液,约10分钟。蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。95%乙醇5秒。伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
3. 脱水、透明、封片或进行其它染色a) 脱水、透明、封片:95%乙醇脱水2分钟。换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察,细胞核呈蓝色,而细胞浆呈粉红色或红色。b) 进行其它染色:如果进行免疫荧光染色,或进行Hoechst等荧光染料的染色,在伊红染色液染色后:70%乙醇洗涤2次,每次2分钟。PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。
显微镜下拍照,进行结果分析。
判断免疫染色切片是否合格;
可用计算机系统处理并分析图片;