10xGenomics单细胞转录组分析的核心就是聚类,但是单细胞转录组分析的聚类到目前为止还存在很多困难和挑战,具体可以参考文献Challenges in unsupervised clustering of single-cell RNA-seq data。这里介绍的聚类、亚群再分析使用的10xGenomics单细胞转录组最常用的seurat软件包。
方法/步骤
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10xGenomics单细胞转录组亚群细分策略 目前较为常见的方法有两种策略: (1)调整亚群分辨率 (2)亚群细胞提取出来,重新从头进行聚类
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(1)调整亚群分辨率 其实调整亚群聚类分辨率来实现亚群细分,官方Guided Clustering Tutorial手册有相关说明。
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(2)亚群细胞提取出来,重新从头进行聚类 这种方式就是要根据表达矩阵和聚类文件,把某一个聚类的所有细胞表达矩阵提取出来,然后重头分析一遍,提取表达矩阵需要两个文件:细胞以及对应聚类编号csv文件:一共两列,第一列为细胞barcode,第二列为聚类编号。 具体提取脚本,会有另外文章说明,这里不再概述。 提取表达量文件后,重新按照pipeline进行分析,得到聚类结果等。
注意事项
上述主要是针对单个样品的亚群细分分析,天津生物芯片提醒您,如果是有比较差异分析的话,还是需要提前表达矩阵或者S4对象,重新聚类、差异分析。
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