吸附柱,收集管,裂解液,洗涤液A,洗涤液B,洗脱液
消化液,RNA Carrier
1. 请自行准备:无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出洗涤液,按以下操作:a) 洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇。b) 洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。3. 取无RNA酶的1.5mL离心管,加入200μL样本,4μLRNA Carrier混合均匀,再加入300μL 裂解液及20μL 消化液,漩涡震荡10秒,充分混匀,56℃水浴10 分钟至完全裂解。4. 加入1000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。5. 将吸附柱放入收集管内,将760μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液.6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。10. 取出吸附柱,放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内,加入30-50μL 洗脱液,静置3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟,收集RNA溶液。11. -70℃保存,或直接用于下一步实验。
为防RNA酶污染,实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩,使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。
洗涤液含有刺激性化学物质,请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清 水或生理盐水冲洗,必要时请就医。