最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于动物组织细胞基因组进行DNA 提取的方法的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
1
首先,取新鲜或冰冻动物组织块0.1g,尽量剪碎。置于玻璃勻浆器中,加人1ml细胞裂解缓冲液,匀浆至不见组织块。
2
然后,转入1.5 ml 离心管中,加人蛋白质酶K 20 ul,混匀。在65C恒温水浴锅中水浴30 min,也可转人37C水浴12~24 h,间歇振荡离心管数次。
3
然后,以12 000 r/min 的转速离心5 min,取上清液人另一离心管中。加入2 倍体积异丙醇,颠倒混匀后,可以看见丝状物,用100 pl 枪头挑出丝状物,晾干,用200 ul TE缓冲液重新溶解。
4
然后,加等体积的酚、氯仿、异戊醇混合液振荡混匀,以12 000 r/min 的转速离心5 min。取上层溶液至另一管,加入等体积的氯仿和异戊醇,振荡混匀,以12 000 r/min的转速离心5 min。
5
然后,取上层溶液至另一管,加入1/2 体积的7.5 mol/L 乙酸铵,再加入2 倍体积的无水乙醇,混匀后室温沉淀2 min,以12 000 r/min 的转速离心10 min。小心弃去上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉。
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然后,用1ml 70% 乙醇洗涤沉淀物1次,以12 000 r/min 的转速离心5 min。小心弃去上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉,室温干燥。
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最后,再加200 pl TE 重新溶解沉淀物,然后置于4C或-20C保存备用。用0.7% (m/V)的琼脂糖凝胶,电泳检测基因组DNA。
注意事项
上述方法为小编整理所得,希望能够帮助到大家。
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