树突状细胞(DC)是一类最为重要的免疫递呈分子,在免疫系统中扮演着重要的角色。由于要模拟体内的免疫学反应,因此,很多时候都涉及到从体内分离DC细胞用于体外刺激。 小鼠由于血液量少,因此,主要从骨髓中分离单核细胞,再诱导成为DC细胞。
工具/原料
工具及原料请参考步骤
方法/步骤
1
颈椎脱臼杀小鼠,剥去小鼠腿部皮毛,露出腿骨,在图上骨节处剪断,分离俩腿骨;
2
浸泡于1640培养基中,置于冰上,转入细胞房操作;
3
除去腿部肌肉组织,在图上A. B. C. D. 四处分别剪断,用镊子拾取腿骨,用10ml注射器吸取1640培养基,将骨髓冲洗如250px2培养皿中,并用注射器将细胞吹散开;
4
离心,用10 ml 1640培养基+30% AG8653细胞培养液上清(含GM-CSF等因子)重悬,计数;
5
(可选步骤:加冷的2ml红细胞裂解液,裂解2min,离心重悬)
6
按大约1x107 cell/dish铺细胞,37℃培养三天;
7
第三天的时候,将培养皿斜靠在一移液管上,静止几分钟,待细胞大部分沉降之后,吸取上清5ml,再补充5ml培养基,继续培养三-四天;(因为DC介于半贴壁,为了保证所有DC状态一致)
8
第七天,用枪吹下细胞,收获细胞,用于后续实验。
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