碱裂解法大量提取质粒方法

首先，取培养至对数生长后期的含质粒的细菌培养液250mL装于离心瓶中，4C 下5000r/min离心15min，弃上清，将离心管倒置使上清液全部流尽。

然后，将细菌沉淀重新悬浮于50mL用冰预冷的STE溶液中，同步骤1方法离心，以收集细菌细胞。将细菌沉淀物重新悬浮于5mL溶液I中，溶液I 中加入RNA酶A至终浓度20ug mL，充分悬浮菌体细胞。

然后，加入10mL新配制的溶液I，盖紧瓶盖，缓缓地颠倒离心管数次，以充分混匀内容物，冰浴10min。

然后，加5mL用冰预冷的溶液I，摇动离心管数次以混匀内容物，冰上放置15min,此时应形成白色絮状沉淀，4C下5000r/min 离心15min。加入等体积的饱和酚:氯仿，振荡混匀，4C下5000r/min 离心10min。

然后，取上清，加入等体积氯仿,振荡混匀，4C下5000r/min 离心10min，重复一次。取上清，加入1/5 体积的4mol/L NaCl 和10%PEG6000，冰上放置60min。

最后，在4C下5000r/min 离心15min，沉淀用5mL 70%冰冷乙醇洗涤3~5 次，4C下5000r/min条件下离心5min。真空抽干沉淀,溶于0.5~1mI TE或ddH2O 中，分装储于一-20C保存备用。