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western-blot过程中的常见问题及解决方案

western-blot过程中的常见问题及解决方案
1.两块玻璃板之间灌胶,胶总是不平

解决对策:玻璃没有洗干净,应该洗得很干净过硫酸铵和TEMED加量相对较多加完试剂后应摇匀

2.总是漏胶

解决对策:避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损将两块玻璃板摆放对齐,底部处于同一平面操作时将气泡完全排除

3.膜上有明显气泡

解决对策:操作时将气泡完全排除靠膜一侧的滤纸应铺平

4.特异性低

解决对策:优化一抗提高一抗和二抗的稀释度降低SDS-PAGE中蛋白的上样量

5.背景高

解决对策:优化封闭液优化洗涤缓冲液,增加洗涤次数减少曝光时间

6.信号低

解决对策:优化一抗浓缩样品选择更高灵敏度的发光液,如enlight等。

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