聚苯乙烯塑料板(也就是酶标板)40孔或96孔、ELISA检测仪、50μl及100μl加样器、塑料滴头、小毛巾、洗涤瓶。
2. 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在上海恒远生物白介素ELISA试剂盒酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。