植物器官衰老或在逆境下遭到伤害,往往发生膜脂过氧化作用。丙二醛是膜脂过氧化的最终分解产物,其含量可反映植物遭受逆境伤害的程度。MDA从膜上产生的位置释放出来后,可与蛋白质,核酸反应,改变这些大分子的构型,或使之产生交联反应,从而丧失功能,还可使纤维素分子间桥键松弛,或抑制蛋白质的合成。因此,MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。MDA是常用的膜脂过氧化指标,在酸性和高温条件下,可与硫代巴比妥酸(MBA)反应生成红棕色三甲基复合物,其最大吸收波长为532nm,在600nm处有最小吸收峰。
方法/步骤
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实验试剂:10%TCA:10gTCA溶到100ml水中(TCA可放到冰箱中保存) 0.6%TBA(现配现用):0.3gTBA用10%TCA溶液定容到50ml
2
实验步骤:1,MDA提取:称取剪碎的试材1g,加入2ml10%TCA和少量石英砂,研磨至匀浆,再加入TCA进一步研磨,定容到3ml,匀浆在4000r/min离心10min,上清液为样品提取液。 2,显色反应与测定:吸取离心的上清液2ml,(对照加2ml蒸馏水),加入2ml0.6%TBA溶液,混匀物于沸水中反应15min,迅速冷却后再离心,取上清测定450、532、600nm波长下的吸光度值。 3,计算:C=6.45(A532-A600)-0.56A450 Y=CV/W C——MDA浓度 μmol/L V——提取液体积 ml W——植物组织鲜重 g Y——MDA含量 μmol/g
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