微生物DNA提取,一般是指细菌的DNA提取,在生物学领域中是一种必备的实验技能,在很多不同的实验中也会使用。因此稳定,收获率高以及污染小的微生物DNA提取方法是至关重要的,本文主要介绍几种不同的微生物DNA提取方法。
工具/原料
1
样品微生物
2
相关试剂
3
核酸含量以及质量测量仪器
一般性原则
1
分离核酸的一般性原则有:1. 保持核酸一级结构的完整性。2. 防止其他物质的污染。
2
核酸纯化应达到的原则:1. 防止其他生物大分子比如蛋白质的污染。2. 防止其他核酸分子的污染,例如RNA或来自非样品微生物的DNA以及RNA。3. 保持最后得到的核酸溶液内低重金属离子的含量。4. 保持核酸溶液低有机溶剂污染。
3
一般流程:1. 破碎细胞;2. 核酸提取;3. 纯化。
4
常用酶类:Dnase;Rnase。
5
必备试剂:1. 细胞破碎剂;2. 核酸沉淀剂;3. 乙醇。
常见方法
1
快速抽提法:所用试剂少,步骤简略,实验时间较短。
2
蛋白酶/SDS法:实验室最常用简略方法。
3
酚/氯仿/异戊醇抽提法:可先配置三种试剂的master mix再进行实验
4
Standard DNA extraxtion protocol:Most mature and standard protocol.
5
标准DNA提取方法:实验室最常用,同时也是最标准且被认可的试验方法,SDS裂解细胞同时有蛋白酶消除蛋白污染。
注意事项
1
DNA提取后可用电泳或光谱法测定DNA含量以及质量
2
提取前,将微生物培养至适宜浓度(OD1-2)有助于提高DNA提取率
3
提取时注意不同试剂添加比例
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