材料
抗体球蛋白溶液、0.5mol／L(pH9.0)碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1％硫柳汞水溶液、pH7.2或3.0的0.01mol／LPBS
设备
50ml小烧杯、4℃冰箱、电磁搅拌器、透析袋、玻棒
抗体的准备：取适量已知浓度的球蛋白溶液于烧杯中，再加人生理盐水及碳酸盐缓冲液，使最后免疫球蛋白浓度为20mg／ml，碳酸盐缓冲液容量为总量的1／10，混匀，将烧瓴置电磁搅拌器上(速度适当以不起泡沫为宜)5～10min。
荧光素的准备：根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光色素，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。也可用下述公式计算出免疫球蛋白、荧光素的量，还可以算出需加缓冲液的量。a.蛋白溶液：含量Amg／m1；容积Bml。b.总蛋白量(AXB)＝Crag。c.C／20～C／10＝Dmg(如蛋白含量低于20mg／ml，用C／10；如高于20mg／ml，用C／20)。d.荧光素FITC的量：(1／50～2／100)XC＝Emg。e.巳0.5mol／L(pH9.5)碳酸盐缓冲液D／10＝Fml。f. PBS量D-(B+F)=Gml。
结合(或标记)：边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中，避免将荧光素粘于烧瓶壁(大约在5—10min内加完)，加完后，继续避光搅拌12h左右。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右，故需将烧杯和搅拌器一起移人4℃冰箱中。
透析：结合完毕后，将标记的球蛋白溶液离心(2500r／min)20rain，除去其中少量的沉淀物，装入透析袋中，再置于烧杯中，用pH8.0缓冲盐水透析(0～4~C)过夜。
第二步的注意事项 A为蛋白含量，mg／ml；B为蛋白质溶液的容积；C为蛋白总量，mg；D为常数，mg；正为荧光素的量，mg；F为碳酸盐缓冲液的容积，ml；G为PBS的容积，ml。