Cell Counting Kit-8 简称CCK-8 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验。下面介绍一下索莱宝cck8实验步骤及注意事项。
工具/原料
1
实验室
2
实验人员
方法/步骤
1
先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。
2
按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。
3
接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）
4
在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5% CO2），向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数），将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
5
用酶标仪测定在450nm处的吸光度。若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
总结：
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。 2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度。3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
注意事项
1
如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基。
2
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
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