总黄酮的测定方法 黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物,种类繁多, 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷,部分为游离态或与鞣质结合存在。黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物, 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。近年来, 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。
方法/步骤
一、方法 （一）高效液相色谱法 1. 原理 植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。 2．仪器和试剂 （1）高效液相色谱仪 （2）紫外检测器 （3）层析柱 （4）超声波清洗仪 （5）索氏提取器 （6）微孔过滤器（滤膜0.45um） （7）甲醇（色谱纯） （8）芦丁标准品 （9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。 （10）去离子水 （11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液 3. 操作步骤 （1）样品处理 1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。 2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后， 以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。 （2）色谱分离条件 色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um; 流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气； 流 速：lml／min； 柱 温：40℃； 检测波长：360nm； 灵敏度：0.02AUFS； 进样量：20ul。 （3）样品测定：准确吸取样品处理液和标准液各10ul，注入高液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间定性，以其峰面积计算出样品中总黄酮的含量。4、结果计算
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