细胞培养技术在生物制药、疫苗生产和临床细胞治疗等领域都是必不可少的核心环节之一。然而在培养过程中面临一个严重问题是细胞经常会被污染,其中支原体是最主要的污染源。支原体污染后又可通过血清,实验人员和已污染的细胞培养物等途径进行扩散,引发细胞样品的更大面积污染。据统计世界范围内大约有15%-35%的细胞培养物遭受了支原体污染。被支原体污染不会引起细胞外观的明显变化,细胞培养液不会发生浑浊,支并且污染初期阶段在高倍显微镜下观察其细胞形态也不会发生改变,需要花很多的精力去识别。因此细胞支原体污染难以察觉,具有极大的隐蔽性,对细胞的潜在的威胁更大。细胞培养中必须提高对支原体污染的警惕,坚持定期做支原体的检测,努力杜绝污染。所以寻找一种快速简单灵敏的方法进行细胞支原体常规检测就显得尤为重要。这里介绍一种可以在30分钟内完成支原体污染检测的方法。
工具/原料
1
先达基因支原体检测试剂盒
2
荧光定量检测仪
3
水浴锅
方法/步骤
1
取200微升细胞上清液(或细胞悬液)。
2
将上述细胞样品在95℃条件下水浴加热2分钟,作为样品模板备用。
4
上机检测:将配好的反应体系放在荧光定量检测仪中,37℃条件下反应20分钟后判读结果。结果判断:阴性质控反应孔的荧光曲线为水平线, 阳性质控反应孔的荧光曲线呈指数上扬。
注意事项
1
溶液体系配置时请在超净台中进行操作,并带好手套、口罩和实验服。
2
若阴阳性对照孔的曲线与上述结果判断不符, 则本次实验结果无效, 检查操作是否有误, 重新上样。
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