最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于挑选可溶性融合蛋白质的方法的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
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首先,挑单菌落至30ml LB培养液中,37C振荡培养过夜,再取50011过夜菌加人49.5ml 新鲜LB,继续摇菌2.5 h。
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然后,取出2ml 菌液作为未诱导的阴性对照,然后在剩余菌液中加人IPTG诱导蛋白质表达,使IPTG 终浓度达到1mmol/L.
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然后,诱导3h后开始取样,每隔1h取一次,每次1ml,取4次,取出的菌液保存于4摄氏度下。
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然后,将菌液离心,以5 000 r/min 的转速,离心10 min,弃去上清液。
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然后,在沉淀中加入50pl 2XSDS 电泳样品缓冲液和同体积的LB,重新悬起后,于100 沸水浴中加热10 min,取出后立即放冰上冷却。
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最后,将样品离心,以10 000 r/min 的转速,离心lmin,取上清液作SDS- PAGE分析,同时将SDS 分子质量蛋白质标准品作平于处理。
注意事项
上述方法为小编整理所得,希望能够帮助到大家。
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