最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于SMART-RACE 技术获得Pm-cycin Y的eDNA方法的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
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首先，通过逆转录以提取的斑节对虾总RNA为模板，参考SMARTM RACE试剂盒中的逆转录方法合成cDNA第条链。
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然后，将得到的cDNA模板经B-actin通用引物检测，1.2%琼脂糖凝胶电泳检测显示条带清亮且无杂带，然后进行分装，80C保存，备用。1.3.2 Pm-cyelin Y的分子克隆 通过对斑节对虾转录组数据筛选获得cyclin Y的基因片段。
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然后，用Primer5.0软件设计特异性引物F(5'-TGGGCAACAAACAC-3)和R(S'-GCTATTCTGTCATGATCTTG-3)。以cDNA为模板，对该序列进行验证，经Blast比对，获得开放阅读框序列ORF。
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然后，采用cDNA末端快速扩增技术(RapidAmplification of cDNA Ends, RACE)扩增Pm-cyclinY的cDNA的5'和3末端。利用半巢式(semi-nested)PCR方法，首先由GSP1(3'GSP1: 5'-ATCAATGTGCCGTCCTCTGTGTATG-3'和5'GSPI:5'-TCAGGACCCCAGTCTTCACCCAACA-3)和Adaptor primer(接头引物UPM)进行降落PCR反应。
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最后，用双蒸水将反应体系补充至25.0 μL，反应条件为:94C变性4 min; 94'C，30s. 68C，30s, 72C,2 min,30个循环; 72C延伸10 min。
注意事项
上述方法为小编整理所得，希望能够帮助到大家。