注意细节，染出你想要的片子！
工具/原料
片子、脱蜡装备、抗原修复液、3%H2O2，一抗，二抗+HRP，显色剂，乙醇，苏木素，显微镜、二甲苯、中性树胶、盖玻片
方法/步骤
2
抗原修复。配置：3g柠檬酸三钠+RO水至900ml,调PH=6，加水至1000ml。微波炉加热，高火10min(用保鲜膜盖上，记得打孔出气），将片子放入沸腾的水中浸没，放至自然冷却。
3
封闭、孵一抗。将冷却的片子取出，用油笔或石蜡化圈，不要碰到组织。分别滴加100ul左右3%H2O2封闭液（覆盖组织），放至10min,PBS洗3次*3min，滴加5%BSA孵育10min，倾去液体（不洗）滴加一抗，4℃放至过夜。
4
孵二抗、显色、复染。将片子取出，PBS洗3次*3min，滴加二抗+HRP，37℃放置1h，取出片子，PBS洗3次*3min，滴加显色剂镜下显色（最好选取模型组摸出适当的显色时间，后面采用同样时间显色），待显色完成，PBS洗3次*3min,用苏木素进行复染20s,自来水洗3min。
5
脱水、封片、拍照。100%乙醇脱水1min，晾干，二甲苯透明10min，晾干，中性树胶封片。完成过后，第二天即可进行拍照处理，可用ImageJ、ipp等软件分析。
注意事项
1
制备好的4mm厚组织，贴于粘附玻片上；片子前期一定要做好，防止掉片；
2
脱蜡，一定要脱干净，可影响后面片子的整个效果，一般冬天较难脱干净；
3
显色不能过时，颜色会不好看，复染太久也会影响目标蛋白的结果。
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