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脂溶性药物如何进行MTT实验操作?

MTT实验是对药物进行体外培养的细胞毒性的测定的重要手段,也是细胞增殖及细胞活性测定得重要实验。
工具/原料
1

药物 DMSO MTT试剂 酶标仪 DMEM+10%FBS 细胞计数板 细胞计数器

2

显微镜 排枪 96孔板等

方法/步骤
1

将脂溶性药物用DMSO溶解,不得大于1%,因为DMSO本身具有毒性,以免对细胞产生较大的毒性。

2

将消化好的细胞,家培养液进行细胞计数,并确定细胞总数(计数时给细胞计数板中加细胞悬液20ul,进行计数,计算公式:细胞个数/ml=四个方格细胞总数/4*10000)。

3

给每个well中加入200ul的细胞悬液,每个well中含有的细胞总数为10000个。

4

给96孔板外周一圈加PBS,然后将配好的细胞悬液加入其余60个空,细胞培养箱中培养24h,观察。

5

将细胞培养板中的细胞培养液吸走,将配置好的药物加入对应的板区,并给对照组中加入同实验组一定量的含DMSO细胞培养液。

6

将细胞置于培养箱中培养24h,48h,72h,再加5mg/ml的MTT溶液(用PBS配置)20ul。

7

培养4h后,再加150ul/well的DMSO溶液,再在摇床上震摇10min。

8

在酶标仪490nm下,读板,计算细胞抑制率。

注意事项

药物在加入前先过网再过滤膜

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