MTT实验是对药物进行体外培养的细胞毒性的测定的重要手段,也是细胞增殖及细胞活性测定得重要实验。
工具/原料
1
药物 DMSO MTT试剂 酶标仪 DMEM+10%FBS 细胞计数板 细胞计数器
2
显微镜 排枪 96孔板等
方法/步骤
1
将脂溶性药物用DMSO溶解,不得大于1%,因为DMSO本身具有毒性,以免对细胞产生较大的毒性。
2
将消化好的细胞,家培养液进行细胞计数,并确定细胞总数(计数时给细胞计数板中加细胞悬液20ul,进行计数,计算公式:细胞个数/ml=四个方格细胞总数/4*10000)。
3
给每个well中加入200ul的细胞悬液,每个well中含有的细胞总数为10000个。
4
给96孔板外周一圈加PBS,然后将配好的细胞悬液加入其余60个空,细胞培养箱中培养24h,观察。
5
将细胞培养板中的细胞培养液吸走,将配置好的药物加入对应的板区,并给对照组中加入同实验组一定量的含DMSO细胞培养液。
6
将细胞置于培养箱中培养24h,48h,72h,再加5mg/ml的MTT溶液(用PBS配置)20ul。
7
培养4h后,再加150ul/well的DMSO溶液,再在摇床上震摇10min。
8
在酶标仪490nm下,读板,计算细胞抑制率。
注意事项
药物在加入前先过网再过滤膜