MSC防止污染的处理方法

间充质干细胞培养时一旦发生污染很容易导致培养的细胞被破坏，因而尽量保证在培养时及早预防污染的发生，如果发生污染需要重新复苏或者重购细胞再次进行培养，如果是发生较大价值的细胞被污染很难再次获得细胞时，可以采用培养液5~10倍常用抗生素冲击，在抗生素作用24~48小时之后，重新换入常规的间充质干细胞培养液有可能会出现效果。常用于细胞培养的抗生素如下表：+为效应程度在间充质干细胞培养时加入高浓度的抗生素和抗菌素会对细胞本身产生一定的毒性和危害，因此在大量添加之前首先要做好剂量反应，找到合适的计量再进行大量添加，特别是在使用诸如两性霉菌素这类抗生素以及泰乐菌素这类抗霉菌素时更需要注意做好上述反应控制剂量。确定毒性水平以及消除消除培养污染的具体操作步骤如下：1.将细胞稀释到传代浓度，使用没有添加抗生素的培养基来消化、计数和稀释细胞；2.将细胞悬液进行等份分装到多空培养板或几个小培养瓶中，将不同浓度的抗生素或抗菌素分别加入到每个培养孔或者小瓶中进行观察对比。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0mg/ml；3.每天观察细胞状态，如出现脱落、变圆、空泡、和汇合度下降等；4.带确定抗生素对细胞的毒性水平之后，在使用抗生素浓度低于毒性水平2~3倍的培养液培养细胞2~3代；5.培养细胞1代于无抗生素培养基；6.重新进行步骤4；7.培养细胞4~6代于无抗生素培养基，检测是否还存在污染情况。