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Transwell实验测定肿瘤细胞迁移作用

Transwell实验是验证经典的肿瘤细胞迁移作用,具有重复性强,容易量化的优点。下面我就Transwell实验在迁移方面的应用做一个简单的介绍。
工具/原料
1

8.0um Transwell小室24孔板; 吉姆萨染液; BSA;甲醇

2

药物 ;肿瘤细胞;棉签;6孔板

3

正置光学显微镜;超净台;细胞培养箱

1.原理:

将 Transwell 小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

2.实验方法:
1

取对数生长期的肿瘤细胞,以0.1% 牛血清蛋白(BSA)DMEM培养液调整细胞数为1×10^6 cells/ml。

2

取100 ul细胞接种于transwell上室内,加入1.6、4.0、10.0 mg/ml BSGLEE处理过的细胞,对照组加入等体积无血清DMEM培养液,每组设3个复室。

3

下室加入含15%小牛血清的DMEM培养液500 ul,37℃、5% CO2培养24h后,将滤膜上层的细胞用棉签抹去,滤膜以甲醇固定5min。

4

用Giemsa染料染色15min。

5

100倍光镜下选择上下左右中5个不同视野的穿过膜的细胞数,求平均值,按下式计算药物对肿瘤细胞的迁移能力。迁移抑制率=(1-实验组平均迁移细胞数/对照组平均迁移细胞数)×100%。

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