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怎么确定植物叶片的气孔数量分布

气孔是植物叶片进行气体交换的窗口,气孔的形态特征和行为动态是植物光合生理和水分生理研究的一个重要方面。气孔形态观察和气孔运动及其影响因素是植物学和植物生理学两门课程的重要实验内容。观察植物叶片气孔的方法有很多,我们这里利用透明胶带法。我们这里的重点是怎么对观察到的气孔数量进行量化,除了利用测微尺,这里介绍另一种简便好用不费眼的方法 。
工具/原料
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植物叶片、透明胶带、普通显微镜

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一个能拍照的手机、装有PS软件的电脑

方法/步骤
1

首先需要制作观察的样本,这里不再赘述,具体方法参考【[1]陈佰鸿,李新生,曹孜义,姚庆荣. 一种用透明胶带粘取叶片表皮观察气孔的方法[J]. 植物生理学通讯,2004,(02):215-218.】

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用显微镜调到合适的放大倍数,然后用手机从目镜去拍照(建议胳膊和手找支撑点,要不不好拍),拍照效果如下,当然效果还能更好,这和样本的制作以及手机相机的像素有关

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接着用PS打开拍到的图片,首先利用快速选择工具选中视野中的圆形选区,然后Ctrl+T调出自由变换,Ctrl+R调出标尺,拉纵横参考线找到圆心,四分视野(这是根据视野中气孔的数量决定的,太多的话查着费时间,太少又不能说明问题),然后其中理想的四分之一视野进行气孔计数(PS工具栏中吸管工具那一栏有一个计数工具),到时用气孔的数量除以这四分之一的面积,就得到了植物叶片气孔的数量分布

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最后介绍下怎么计算视野面积S。首先要知道目镜视场数N(例:10✖️/18mm,目镜倍数为10,视场数为18mm),还要知道物镜的放大倍数f,那么             S=π(N/2f)2(最后这个2是上标)

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最后得出植物叶片气孔的数量分布(单位:个/mm2)。

注意事项
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用手机拍照时,尽量把视野拍全即为圆形,后面PS作图好找圆形四分视野,并且也更加准确

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要记者观察目镜和物镜的参数

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制作的样本最好能覆盖整个视野,选取计数的四分之一视野中应无叶脉,气孔清晰

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