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PCR上岗证培训——历年考试知识点汇总

在我国新冠病毒疫情防控进入常态化的今天,核酸检测也越来越普及越来越重要。6月8日,国家卫健委发布了《关于加快推进新冠病毒核酸检测的实施意见》,文件提出:二级以上医院应具备开展新冠病毒核酸检测能力。这就意味着全国大量医疗机构需建设PCR实验室。那么建设PCR实验室过程中最主要一点就是人员资质培训,实验室成员必须经过相关培训并通过考核。现将历年理论考试知识点总结如下,供大家参考。
方法/步骤
1

PCR实验室建设、认证审核依据:《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》(卫办医政发〔2010〕194号)、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》

2

临床基因扩增检验实验室技术审核流程包括:申报、资料审核、现场验收、整改、通知审核结果。

3

临床基因扩增实验中质量保证: 室内质控(重复性)和室间质评(准确度)。

4

PCR技术的发明人是:Kary Mullis。

5

核酸包括两种类型:脱氧核糖核酸(ATCG)和核糖核酸(AUCG)。

6

根据遗传中心法则,遗传信息的流动方向为DNA⇔RNA⇒蛋白质。

7

临床基因扩增检验实验室一般包括四个分区:试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。

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核酸样品含量可根据(   )处波长的吸光度算出。260nm

9

核酸样品纯度可根据(   )处波长的吸光度比值算出。 260/280nm

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cfDNA是指 细胞游离DNA,ctDNA是指循环肿瘤DNA。

11

PCR检测用的试剂应当 经国家药监局批准。

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医疗废物垃圾袋结扎采用 “鹅口颈”套扎结扎。

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锐器盒容积达到总体积的(   )时需要更换。 3/4

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PCR中,全血样本采集一般 使用EDTA或枸橼酸盐抗凝,不使用肝素抗凝。

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Taqman探针两端标记有 荧光基团和淬灭基团。

16

新冠病毒核酸检测应该 在Ⅱ级生物安全实验室开展,同时采用生物安全Ⅲ级实验室的个人防护。

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PCR基本反应过程包括 变性、退火、延伸。

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核酸的基本结构单位是: 核苷酸,其组成包括碱基、核糖或脱氧核糖和磷酸。

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DNA双链中 碱基A-T之间以两个氢键相连,G-C以三个氢键相连。

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PCR试剂盒中 加入尿苷糖基酶(UNG)具有防“污染”作用。

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DNA变性是指在物理或化学因素的作用下,导致两条DNA链之间的氢键断裂,而核酸分子中其他共价键不受影响。

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PCR的测定点在PCR的指数扩增期,非平台期。

24

临床检验中的随机误差通常表现为质控物测定结果的SD增大。

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核酸溶于水,不溶于乙醇等有机溶剂。

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核酸的解链温度(Tm)与G+C含量有关,G+C含量愈大,Tm愈高。

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以次氯酸为主要成分的清洁剂在配制后24小时内使用。

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质量管理体系要素包括质量方针、质量目标和质量指标。

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核酸的复制是由5’-3’方向进行。

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DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。

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核酸提取纯化中,RNase潜在污染源是: 实验室环境、实验用品如吸头、离心管等、实验人员的手。

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生物安全水平的级别共分为 四个等级。

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PCR出现基线漂移的可能原因有: 蒸发、探针水解、相邻荧光通道干扰等。

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常用RNase抑制剂是 DEPC(焦碳酸二乙酯)。

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Sanger测序体系与PCR反应体系的主要区别是 前者含有:ddNTP

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mRNA约占总RNA的 5%

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核酸检测对标本采集容器的要求是: 密闭、一次性、无DNase和RNase、无菌。

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肝素是TaqDNA聚合酶活性的 强抑制剂。

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PCR采用内标可识别扩增检测的 假阴性、假阳性。

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Taqman荧光探针常用的荧光基团是: FAM,TET, VIC, HEX。

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新检测系统(   )情况下应进行性能验证。常规应用前、常规使用期间(定期)、更换试剂、仪器、校准品溯源性改变、仪器搬迁、设施、环境严重失控等

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PCR室内质控品的浓度设置:弱阳性质控(浓度为检测限2-4倍),阳性质控,阴性质控品。

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生物安全柜、超净工作台、通风橱三者的区别:

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阳性室内质控品出现假阴性失控的常见原因分析:(1)核酸提取中的随机误差,如核酸提取中的丢失,有机溶剂的去除不彻底,标本中扩增抑制物的残留,所用耗材如离心管有PCR抑制物等。(2)仪器的问题,如扩增仪孔间温度的不一致性,孔内温度与所示温度的不一致性等。     (3)试剂的问题,如Taq酶和/或反转录酶的失活,探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。

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阳性室内质控品出现假阴性失控的常见原因分析:(1)扩增产物的污染(2)临床标本的核酸提取过程中发生的样本间的交叉污染。(3)喷枪等关键耗材污染(4)试剂污染(5)仪器故障

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出现实验室污染怎么办?(1)开窗通风(2)用次氯酸钠溶液清洗地面,实验台、墙面(3)增加紫外灯照射时间(4)用75%乙醇空中喷雾等方法去除(5)每天进行上述过程,直到污染消除。

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