最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于菌体内可溶性表达蛋白质的过程的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
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首先,取50ml菌液于洁净的离心管中,在4摄氏度5000r/min离心五分钟,弃去上清液,收集菌体的沉淀。
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然后,用四到五倍体积的冰冷20mmol/L磷酸盐缓冲液PBS洗涤菌体,在8000r/min下离心三分钟,进行重复两次。
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然后,将沉淀中加入3ml冰冷的PBS,进行充分的混匀,再悬浮菌体,加入30微升的10mg/ml溶菌酶,进行混匀,在37摄氏度下水浴十五分钟。
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然后,加入300微升的10%的SDS进行混匀,室温放置十五分钟,在冰浴条件下,将超声波探头没入悬浮液内,在200-300W功率进行超声波破碎,超声五秒,停五秒,一般总超声时间为半小时。
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然后,在4摄氏度12000r/min下离心十分钟,回收上清液,缓慢加入固体硫酸铵,同时轻轻地上下颠倒混匀,至35%饱和度,在12000r/min下离心十五分钟,回收上清液。
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最后,继续加入固体硫酸铵溶液至85%饱和度,在4摄氏度下静置过夜,再再12000r/min下离心十五分钟,弃上清液,沉淀溶于2ml的PBS中,并装入透析袋中,用相同的缓冲液透析过夜。
注意事项
上述方法为小编整理所得,希望能够帮助到大家。
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