细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。这里主要介绍Annexin V 检测凋亡细胞膜的改变。
工具/原料
1
10X Binding Buffer 、Propidium Iodide、Via-Probe™ 、1X PBS Buffer
2
FITC Annexin V 、10X Annexin V Binding Buffer
方法/步骤
1
取Falcon试管，按标本顺序编好阴性对照管和标本管号。
2
使用冷的PBS缓冲液洗细胞两次，再用1xBinding Buffer缓冲液制成1x106细胞/ml的悬液。试剂由优宁维生物提供。
3
Falcon试管中加入100μl 细胞悬液。
4
按以下体积加入AnnexinV与核酸染料：
5
轻轻混匀，室温（20°C ~25°C）避光处放置15分钟。
6
使用Annexin V-Biotin试剂进行检测时: ● 1xBinding Buffer缓冲液洗细胞一次，去上清。 ● 1xBinding Buffer缓冲液100µl溶解SAv-FITC试剂0.5µg，加入到细胞管中。 ● 轻轻混匀。加入5µl PI，室温（20-25°C）避光处放置15分钟。
7
各试验管中分别加入1xBinding Buffer缓冲液400µl。1小时内上流式细胞仪测定结果。
注意事项
不同的细胞系，以及凋亡的不同阶段，其Annexin V位点饱和所需要的纯化的重组Annexin V含量不同。某些情况下，为达到最好效果，可以减少细胞数量，0.5x10^5个细胞加5-15µg纯化的重组Annexin V。
上一篇：核酸检测结果怎么查询