缓冲液，酶，理盐水/PBS/培养基，组织
无菌剪刀或手术刀，移液枪
一，酶的选择胶原酶又称胶原蛋白酶，用于分解天然胶原蛋白。在单细胞样本制备过程中，胶原酶消化是必不可少的一步。除少数例外外，不同的商业胶原酶都是制备自梭状芽孢杆菌，或为大肠杆菌表达的梭状芽孢杆菌克隆基因的重组蛋白。
二，制备流程1. 用无菌剪刀或手术刀将组织切成2-4毫米的碎块。2. 在冰上将碎组织加入适当的缓冲液或平衡盐溶液中，清洗2-3次。这里一般会采用预冷的生理盐水/PBS/培养基等等，此外为了减少细胞损伤，还可以根据情况添加 FBS 或者 BSA。3. 加入适量的酶，并在最佳温度（通常为37°C）下孵育适当的时间，并间歇的混匀。消化时间与组织的类别很有关系，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h， 对于容易消化的组织可以采用37℃ 震荡消化15~45min，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可 以认为已消化充分。4. 通过移液枪或研磨的方式轻轻分散细胞。这是单细胞制备至关重要的一步。过度的话，就会破坏细胞；不足的话，则会降低细胞收率。5. 通过合适的滤网过滤细胞悬液。6. 让细胞沉降并倒出多余的含酶液体。7. 洗涤并重复2-3次。在适当的培养基或缓冲液中重悬细胞。细胞碎片可以在此步通过离心初步去除，通常条件为300g 或1000~1500 rpm 的条件下 5 min。8. 使用台盼蓝或者荧光计数的方式对细胞数和细胞活性进行定量。9. 如果需要，将细胞进行原代培养。
制备技巧1，组织处理方法 传统组织处理方法有机械法，包括网搓法、研磨法，一般适用样本类型为脾脏、淋巴结、胸腺；此外还有商业化的自动组织破碎仪和消化液可供，选择商业化的试剂盒，也为客户省去了很大一部分的实验摸索步骤。2，酶消化条件的选择天津生物芯片建议老师首先查阅文献，根据文献中所使用的酶、工作浓度、缓冲系统等，拟定出一个初步的解离条件。3，移液技术和枪头选择在解离组织或处理悬浮状态的细胞时，移液器枪头尽量使用宽口枪头，并且动作要尽量轻柔。4，细胞清洗与过滤对于单细胞实验，细胞重悬液建议使用含有0.04% BSA、不含 Ca++、Mg++ 和 EDTA 的1× PBS 清洗两次（300g，5min）。这一过程需要避免使细胞悬浮液起泡。5，细胞计数和活力评估测定细胞活力有许多种方法，最为经典的是通过台盼蓝染色，使用细胞计数板在显微镜下进行手动计数。6，样本类型的影响从经验上来说，髓系细胞和 B 细胞极容易凋亡，完全不可冻存。