本文节选自本人读研期间的专利；专利号2.X本发明采用三层包埋法对双歧杆菌进行包埋，先以海藻酸钠为壁材包裹菌体，再用壳聚糖进行第二次包裹形成耐酸性能更好的双层微胶囊，最后用棕榈油进行第三层包埋，可以得到稳定性最强，最不易泄漏的双歧杆菌微胶囊，目前国内外关于双歧杆菌三层包埋的研究几乎没有。
方法/步骤
1
将双歧杆菌接种于MRS肉汤培养基，活化三次后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，洗涤后与0.85%-0.9%无菌生理盐水混合配制成一定浓度的菌悬液以备使用。
2
配制浓度（1%-3%）且含益生元量为（3%-9%）的海藻酸钠溶液，110℃，灭菌15min。制备除氧剂，配制除氧剂的浓溶液，过滤除菌以备使用。将菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照1：（5-20）的比例混合，除氧剂按照菌胶液总量的0.03%～0.09%的添加量加入，并在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。
4
配制含1%-3%壳聚糖、含1%-5%瓜尔胶的混合溶液，灭菌（110℃，10min）。将单层包埋的双歧杆菌微胶囊与壳聚糖-瓜尔胶混合溶液按质量体积比1:（5-20）的比例混合，搅拌均匀，制成双层包埋的双歧杆菌微胶囊。
5
将棕榈油加入0.4%的吐温-80后（110℃，10min）。然后将制得的双层双歧杆菌微胶囊与棕榈油按质量体积比1：（10-20）的比例混合，搅拌均匀，制成三层包埋的双歧杆菌微胶囊，离心收集。
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