生物素又称维生素H、辅酶R，是水溶性维生素，也属于维生素B族。它是合成维生素C的必要物质，是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。 生物素(Biotin)定量测定试剂盒是一种新型的检测方法。用生物素包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的生物素与包被的生物素竞争辣根过氧化物酶标记的亲和素上的结合位点，生物素与亲和素特异性结合而形成复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，生物素浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中生物素的浓度。
工具/原料
1
酶标仪(450nm波长滤光片)
2
高精度移液器，EP管及一次性吸头
3
0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
4
37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
5
吸水纸
6
生物素定量测定试剂盒（Cata.No:EBD0325, Elabscience)
方法/步骤
1
加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 50μL，余孔分 别加标准品或待测样品 50μL，立即每孔加入配好的 Avidin-HRP 工作液 50μL（在使用前 15 分钟内配制），注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃 动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 30 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的 标准品溶液。
2
弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL /每孔，甩干并在吸水纸 上轻拍将孔内液体拍干。
3
每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。
4
每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的 加入顺序相同。
5
立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪 器，设置好检测程序。
6
实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。
注意事项
1
不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）
2
试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！