1 Gomori钙钴法【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠 5ml 2%巴比妥钠 5ml 蒸馏水 10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】 (1)将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，待细胞长满玻片后取出。 (2)PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。 (3)入孵育液中，37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。 (4)2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。 (5)1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。
2 偶氮偶联法 【孵育液配制】 萘酚AS-BI磷酸盐 20mg DMSO 0.5ml 0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液(PH 9.2) 50ml 六偶氮副品红 0.5ml 1mol/L NaOH调PH 9-10，混合后过滤使用。(六偶氮副品红：副品红400mg，浓盐酸2ml，双蒸水8ml混合过滤;临用前与等体积4%亚硝酸钠混合) 【步骤】 (1)细胞爬片成功后，PBS冲洗后，置入4℃ 10%甲醛固定10min。 (2)蒸馏水冲洗。 (3)将过滤孵液直接滴加于玻片上，室温下作用45min。 (4)流水冲洗，晾干。 (5)甘油明胶封固。 【结果】成骨细胞胞质中可见红色ALP阳性颗粒。
3 碱性磷酸酶染色试剂盒法 【作用原理】 细胞内碱性磷酸酶在Ph9.4-9.6条件下水解磷酸萘酚AS-MX产生萘酚，后者被重氮盐捕获，生成不溶性有色沉淀。
4.PNPP偶氮法 【步骤】 (1)用吸管吸掉96孔板内的培养液，用PBS冲洗3遍，加入含25mmol/L二乙醇胺，1mmol/L氯化镁和6.7mmol/L PNPP的反应液。 (2)每孔150ul.37℃避光放置半小时,然后加0.1mol/L氢氧化钠100ul终止反应,用酶标仪于405nm波长下测定OD值. (3)样品OD值在ALP标准曲线上读取酶活性值(U/L). ALP标准曲线绘制: 取PNP0.0111克用三蒸水溶解后稀释至250ml,此时PNP的浓度为320umol/L.依次稀释到160 umol/L，80umol/L,40umol/L,20umol/L,10umol/L和5mol/L.相当于ALP1280 U/L,640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L和20U/L(活性值).用酶标仪于405nm波长下测定PNP的OD值.以ALP活性值作为自变量,对应的OD值作为应变量,求得直线回归方程. 【结果】测定碱性磷酸酶的含量
6. 茜素红法 【步骤】 (1)培养皿用PBS冲洗2次，95%乙醇固定10min，双蒸水冲洗3次。 (2)0.1%茜素红-Tris-Hcl(PH 8.3)37℃，30min。 (3)蒸馏水冲洗，干燥，封片。 【结果】染料品种的不同，矿化结节呈现不同的红色。
7. von Kossa法 【步骤】 (1)培养皿用PBS冲洗2次，4%多聚甲醛固定5分钟，双蒸水冲洗3次。 (2)培养皿中加入5%硝酸银溶液1ml，将培养板开盖在紫外灯下照射1小时。 (3)倒出残留的硝酸银溶液，蒸馏水冲洗3遍。 (4)培养皿中加入5%硫代硫酸钠溶液1ml，中和残留的硝酸银溶液，吸出残液。 (5)室温下晾干，封固。 【结果】钙结节呈现清晰可见的黑颜色