产品组成:OneShine SybrGreen preMix(2×conc.)含有Real Time PCR反应所需要的Taq Polymerase、Reaction Buffer(包含适当浓度的Mg2+和dNTPs)、SybrGreen、ddH2O等。
使用方式:在体系配制时,将待检测的模板和设计好的引物对以适当浓度加入即可。
应用范围:OneShine SybrGreen preMix可适用于动物(如人、小鼠)、植物(如白掌)、真菌(如蕈菌)、细菌(如大肠杆菌)、病毒(如慢病毒)等的cDNA检测,也可适用于DNA片段(如PCR产物)、基因组、质粒等的检测。
适用仪器:OneShine SybrGreen preMix适用于各类型实时荧光定量PCR系统,包括Mastercycler、BioRAD系列、罗氏系列、ABI系列等。
反应体系的配制以25 ul为例:(配比表见附图)反应程序的设定以Bio-Rad CFX Real Time PCR仪为例:基因表达量的检测-扩增曲线的生成, 95℃ 3min 95℃ 10s 60℃ 30s (此步骤末收集信号) 40 cycles。引物特异性检测-熔解曲线的生成, 95℃ 10s 65℃ -95℃, 每半℃升一次温度,持续5s(此步骤末收集信号)。
本品长期保存需要在-20℃下。
本品需要保存在避光条件下。若在室内光照超过12h,则应视产品为失效;经实测产品处于实验室日光灯下12h后则无法正常使用。
配制PCR体系时需要在冰上和弱光环境中操作,最好关闭实验室日光灯或打开非直射的日光灯。
使用时请上下轻轻颠倒混匀,以避免成分不均影响实验结果,但是同时应避免气泡的产生。
若短期内多次使用,则可以将本产品放置在4度避光保存。避免反复冻融超过10次,经实测产品从-80℃至室温反复冻融10次以上则性能下滑。
本产品扩增片段的长度不宜超过250bp,因此应根据检测的特异性需要设计合适的引物对用于检测目的片段的表达量。反应循环数不宜超过70 cycles。
请使用与所在实验室荧光实时定量PCR仪相匹配的Real Time PCR管或Real Time PCR板。体系配好后应在适配的离心机中离心,除去管底加样时产生的气泡。避免用有荧光染料污染可能的器物表面接触PCR管的盖子或光学级封膜。
可以设计一对引物检测提取的RNA中是否有基因组的污染,设计时应保证至少有一端的引物设计在内含子区域;若无内含子,则可以将上游引物设计在启动子区,经过PCR验证确保模板中无基因组的污染。
本产品用于常规Real Time PCR检测体系的配制,若需要检测极端微量的cDNA或DNA,的OneShine SybrGreen preMix Plus试剂盒。
应确保所在实验室仪器正常,并处于正确校准后的运行之中。若需要校准Real Time PCR仪可联系仪器出产厂家,;本公司提供各种品牌实时荧光定量PCR仪的校准方法、器材和试剂。欢迎垂询。