待检血清、标准阴阳性血清、PBS缓冲液、1%鸡红细胞、96孔血凝板等等
试验前准备试验前要准备好操作HI试验的所有材料,包括待检测的血清、标准阴性血清和阳性血清、PBS缓冲液、1%鸡红细胞(具体制作可参见本编经验“1%鸡红细胞制备方法”)、96孔血凝板、移液器及吸头等等。
测定抗原HA效价HA即血凝试验,是进行HI试验必须具备的步骤。首先要测定所使用抗原的血凝价,便于后续配置四单位抗原。
四单位抗原的配置及验证测定好抗原的血凝价后,就可配置四单位抗原了。配置好后,要对四单位抗原进行验证,确保配置的精确性。
倍比稀释待检血清首先在96孔血凝板内加入PBS,每孔25微升,然后在第一纵排标记样品序号“1、2、3.....6”,第7横排设为阴性血清对照,第8横排设为阳性血清对照。然后用八道移液器反复吹打第1竖排孔,约8下左右,吸取25微升加入第2竖排,再吹打稀释,吸取25微升加入第3竖排,以此类推,直至最后一孔,吸取25微升弃去,至此,血清倍比稀释完毕。
加四单位抗原在稀释好的板内,每孔加入25微升验证好的四单位抗原液,注意加的时候尽量从最后一竖排往前加,即从低浓度到高浓度,保证不污染孔。
抗原抗体作用加入抗原后,血清中的抗体即与抗原发生作用,25℃作用20分钟即可,若有抗体,则抗体与抗原结合,抗原就不能与红细胞结合。
加1%鸡红细胞抗体抗原作用完毕后,就可以加1%鸡红细胞了,每孔25微升,注意加的时候吸头尽量垂直于血凝板,在其上方0.5cm处,以免造成污染。
继续作用20min加完红细胞后,整个体系还要作用20min,此时,红细胞会与未被结合的抗原发生结合,出现凝集现象。
读取结果作用完毕后,就可以读取结果了,要将血凝板竖起来,在背面读数,以红细胞能完全流下来的孔作为血清的HI滴度,前提阴性阳性血清需成立,即阴性血清孔出现完全凝集,阳性血清滴度与标注的相差1个滴度以内。
HI试验是专业性很强的试验,需要操作者具备一定的相关常识才可。
每次加样,吸头都要垂直且离开血凝板一定距离哦,保证不污染。
觉得实用就给个赞吧