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怎样操作HI试验测定血清抗体

HI试验即血凝抑制试验,是测定禽流感、新城疫、减蛋综合症等有血凝性抗原血清抗体的常用方法,所有的禽病化验室和研究单位都要用到此方法。但是,目前还有很多人不太懂相关的操作,或者不熟悉怎么样去控制条件,下面就是小编分享的经验。
工具/原料

待检血清、标准阴阳性血清、PBS缓冲液、1%鸡红细胞、96孔血凝板等等

方法/步骤
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试验前准备试验前要准备好操作HI试验的所有材料,包括待检测的血清、标准阴性血清和阳性血清、PBS缓冲液、1%鸡红细胞(具体制作可参见本编经验“1%鸡红细胞制备方法”)、96孔血凝板、移液器及吸头等等。

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测定抗原HA效价HA即血凝试验,是进行HI试验必须具备的步骤。首先要测定所使用抗原的血凝价,便于后续配置四单位抗原。

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四单位抗原的配置及验证测定好抗原的血凝价后,就可配置四单位抗原了。配置好后,要对四单位抗原进行验证,确保配置的精确性。

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倍比稀释待检血清首先在96孔血凝板内加入PBS,每孔25微升,然后在第一纵排标记样品序号“1、2、3.....6”,第7横排设为阴性血清对照,第8横排设为阳性血清对照。然后用八道移液器反复吹打第1竖排孔,约8下左右,吸取25微升加入第2竖排,再吹打稀释,吸取25微升加入第3竖排,以此类推,直至最后一孔,吸取25微升弃去,至此,血清倍比稀释完毕。

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加四单位抗原在稀释好的板内,每孔加入25微升验证好的四单位抗原液,注意加的时候尽量从最后一竖排往前加,即从低浓度到高浓度,保证不污染孔。

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抗原抗体作用加入抗原后,血清中的抗体即与抗原发生作用,25℃作用20分钟即可,若有抗体,则抗体与抗原结合,抗原就不能与红细胞结合。

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加1%鸡红细胞抗体抗原作用完毕后,就可以加1%鸡红细胞了,每孔25微升,注意加的时候吸头尽量垂直于血凝板,在其上方0.5cm处,以免造成污染。

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继续作用20min加完红细胞后,整个体系还要作用20min,此时,红细胞会与未被结合的抗原发生结合,出现凝集现象。

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读取结果作用完毕后,就可以读取结果了,要将血凝板竖起来,在背面读数,以红细胞能完全流下来的孔作为血清的HI滴度,前提阴性阳性血清需成立,即阴性血清孔出现完全凝集,阳性血清滴度与标注的相差1个滴度以内。

注意事项
1

HI试验是专业性很强的试验,需要操作者具备一定的相关常识才可。

2

每次加样,吸头都要垂直且离开血凝板一定距离哦,保证不污染。

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