融合PCR操作步骤（利用融合PCR连接两个片段）
工具/原料
dNTPs 、10×Buffer 、Taq 酶为Promega公司。
方法/步骤
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2.分别PCR扩增A和B片段，25μL体系一次扩增8管含有一管阴性对照，切胶回收这两个片段。如上图第一步，单独扩增A和B片段
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3.以A和B两个片段为模板，进行融合PCR实验。融合PCR分为两步，操作步骤如下：第一步：（不加引物）dNTPs 1μl10×Buffer 2.5μlTemplate DNA （A和B） 各1μlTaq 酶 0.5μlRNaseA-free H2O 19μlTotal 25μl循环参数：95℃预变性 5min，94℃变性 20s、57℃退火 20s、72℃延伸 40s 进行 10个循环，72℃延伸 5min。如上图第二步：（第一步不需要添加引物，因为让A和B片段具有互补片段，可以互为引物扩增）
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4.第二步：10个循环后，取出反应管加入引物。循环参数：95℃预变性 5min，94℃变性 20s、60℃退火 20s、72℃延伸 40s 进行 10个循环，72℃延伸 5min。待反应完毕后，1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定 PCR 产物。如上图第三步
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