太平洋鳕各组织总RNA的提取方法

首先，提取太平洋鳕各组织中的总RNA，再进行反转录对太平洋鳕各组织和仔鱼进行总RNA提取，提取方法参照动物组织总RNA提取试剂盒说明书。

然后，用移液枪吸取4uL的总RNA，再用于1%WV琼脂糖凝胶电泳，取2 μL总RNA用于微量分光光度计测定RNA的OD值，OD比值在1.9~2.1 的RNA选为可用RNA。

然后，按照试剂盒上的说明，再将以10μL体系对500 ng总RNA进行反转录反应。

然后，进行IRF3基因的扩增及序列测定，根据本实验室太平洋鳕转录组信息中已获得的  IRF3部分序列设计引物，应用IRF3F1、 IRF3R1和IRF3F2、IRF3R2两对引物分别对IRF3的5!端和3’端进行PCR扩增。

然后，进行测定两对引物的反应，条件均为:94C预变性5 min; 94"C 30 s, 58°C 30s, 72C 1min, 35个循环; 72C延伸10min,扩增产物以1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。

最后，将引物经纯化后，连接到pMD18-T载体，重组质粒分别命名为pMD18-IRF3a  和pMD18-IRF3b,再经转化大肠杆菌DHSa，将阳性克降送至测序。