在科研中,PCR是最基础的实验操作,如何设计特异性好的PCR的引物呢?
工具/原料
1
模板序列
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Primer5.0和oligo6.0常用软件
方法/步骤
1
首先要下载自己的模板序列,即PCR扩增的模板,一般是通过NCBI提交的基因序列为准。
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模板序列确定了以后,就是通过primer5.0分析其反向互补序列,并且通过primer5.0筛选出得分比较高的几对引物。
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最后打开NCBI,通过blast自己的引物,得出特异性大小的分析。
注意事项
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总体来说经过这几步骤选择的引物特性性较好,PCR效率较高。
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在实验中要摸索PCR反应的最佳退火温度和最适模板浓度。
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