AsA和DHA测定方法

1 10ml 150mmPBS PH 7.4 ：称0.23g NaH2PO4.2H2O和0.54g Na2HPO4.H2O，用水定容至10 ml,用NaOH 调PH至7.4 2 3ml 10mm DTT 0.0047g DTT 定容至3ml 3 3ml 5%(w/v)N-乙基顺丁烯二酰甲胺（NEM）:0.15g NEM 定容至3 ml 。水溶加热易溶解

4 20ml 10% (w/v)TCA :2g TCA 定容至20ml 5 20 ml 44 % (v/v)H3PO4: 8.8ml H3PO4 定容至20ml 6 20 ml 4%（w/v）Dipyridgl in 70%（v/V）ethanol 0.8g Dipyridgl 用70% 酒精定容至20 ml 7 10ml 3%(w/v)Fecl3 0.3g Fecl3定容至10 ml

1 0.3g样品用5%偏磷酸（或5%TCA 三氯酸）2ml 研磨，15000g离心20min，上清液用于测定

2 AsA的测定：0.2ml上清液+0.2ml 150Mm PBS（PH=7.4）+0.2ml 水

3 DHA+AsA 的测定：0.2ml 上清液+0.2ml 150 mMPBS（PH7.4）+0.1ml 10mm DTT 涡旋，室温放置15min，之后加入0.1 ml 0.5%（w/v）N-乙基顺丁烯二酰亚胺

4 将由2、3 得到的溶液分别涡旋，室温放置>30s

5 分别向经4 处理的混合液中各加入0.4ml 10% (u/v)TCA,0.4ml44%（v/v）H3PO4，0.4 ml Dipyridgl in 70%（v/V）ethanol 和0.2ml 3%（w/v）Fecl3,涡旋，37℃放置60 min

6 测A525